本发明公开了一种海南九节茎提取物的制备方法，是在海南九节茎的干燥粉末中加入石油醚溶剂提取；提取液经过滤、减压浓缩得到石油醚溶解提取物，石油醚溶解提取物经硅胶柱色谱，采用纯净石油醚作为溶剂，洗脱除掉提取物中的长链油脂蜡成分后，再用乙酸乙酯洗脱冲柱，流出液真空浓缩，得到具有广泛抗菌活性的石油醚提取精华物；石油醚提取精华物再经反复柱层析，得到7个三萜类化合物、1个甾醇类化合物和2个黄酮类化合物。本发明制得的提取物得率高，工艺流程简单，成本低廉，适合较大规模的制备，提取物具有很好的抗菌活性，可以应用于辅助抗菌消炎药物中。