本发明公开了一种绿僵菌高孢粉的制备方法，包括以下步骤：在试管中进行绿僵菌菌种斜面培养基的制作，并利用斜面培养基对绿僵菌菌种进行传代培养、活化；在试管中斜面培养基表面长满孢子时，从斜面培养基中取部分孢子及菌苔，将孢子及菌苔接入液体培养基中；将载有孢子及菌苔的液体培养基在恒温振荡箱中恒温培养，至液体培养液中出现粘稠菌丝体；将出现粘稠菌丝体的液体培养液与营养液混合，得混合的绿僵菌培养液，将培养液均匀喷洒在平铺的布块上，布块经蒸汽高温灭菌，且置于发酵容器进行发酵。该绿僵菌高孢粉的制备方法，利用布块作为培养载体能够降低培养成本，同时便于后期孢子的收集，土霉素的加入能够保证绿僵菌的生长环境。