本发明提供一种制备木薯钙调蛋白单克隆抗体的方法及该方法制备的抗体，所述方法包括以下步骤：用纯化的融合蛋白ACP‑CaM与佐剂免疫小鼠；用生理盐水稀释的融合蛋白ACP‑CaM腹腔冲击小鼠；取所述小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合；融合后采用HAT培养液培养和间接ELISA检测筛选，获得阳性杂交瘤细胞；用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行克隆化直至出现阳性单克隆率为100％；排除抗体与标签蛋白ACP有交叉反应的阳性杂交瘤细胞；采用小鼠体内诱生腹水法制备钙调蛋白单克隆抗体；纯化所述钙调蛋白单克隆抗体。通过本发明方法制备的钙调蛋白单克隆抗体具有高效价、高稳定性和高特异性。