本发明公开了一种检测芒果露水斑病菌的方法，包括对被检样品进行预处理，提取被检样品的DNA；采用ITS1/ITS4做外侧引物，ML‑SF9和ML‑SR5做内侧及ML‑SF10和ML‑SR10做内侧引物进行巢式PCR反应；电泳检测，判断结果。本发明的检测芒果露水斑病菌的方法克服了常规PCR检测方法的不足，具有高灵敏度、高特异性、反应稳定的优点，检测下限至少可达到3.55×10‑10ng/μl，易操作，用时短，只需4‑6h。