本发明提供了一种从发酵培养物中提取大观霉素的方法。本发明采用液体离子交换剂对大观霉素进行提取，所述液体离子交换剂中磺酸基与大观霉素具有良好的结合能力，能够选择性地将大观霉素从含有大量杂质的体系中快速、准确的提取。采用本发明提供的方法，大观霉素收率可高达65％以上，纯度达98％，产品质量好，符合EP、USP质量标准，并具有周期短、排污量少、生产成本低等优势。