本发明公开了一种杭白菊叶提取物及其制备方法和在抑菌杀菌中的应用。杭白菊叶提取物的制备方法，包括以下步骤：用乙醇水溶液对杭白菊叶粉末进行浸提，获得的浸提液经浓缩后，得到杭白菊叶浸膏；先用水稀释杭白菊叶浸膏，对浸膏进行大孔树脂柱层析，依次采用水和体积浓度为30～90％的乙醇水溶液进行洗脱，获得的洗脱组分，经减压浓缩和冷冻干燥，得到杭白菊叶提取物。本发明采用乙醇水浸提和大孔树脂层析的方式获得了具有抑菌、杀菌作用的杭白菊叶提取物，且抑菌活性随着杭白菊叶提取物浓度的增加而增强，为以杭白菊叶提取物为基础的抑菌产品的生产和推广奠定了基础。