本发明涉及体外剔除T细胞中靶基因的方法以及该方法中使用的crRNA具体地，本发明涉及基於CRISPR-Cas9系统的体外剔除T细胞中靶基因的方法另一方面，本发明提供了针对靶基因TRAC、B2M和PD1的crRNA以及包含所述crRNA与Cas9蛋白对应的tracrRNA连接形成的的sgRNA、Cas9蛋白、寡聚去氧核糖核酸(N-oligo)或鱼精DNA片段的用於剔除T细胞中的TCR、B2M和/或PD1基因的试剂盒本发明还提供了根据本发明的方法所获得的基因剔除的T细胞及其用途