本发明提供了用于检测人类EGFR基因T790M突变的引物、检测方法及试剂盒。本发明提供的检测引物能与EGFR基因保守序列结合，扩增突变序列。本发明提供的检测方法采用检测荧光信号基团能与扩增片段结合发出荧光信号，利用阻断剂与突变位点对应的野生型序列特异性结合，抑制野生型非特异性扩增。本发明采用竞争性等位基因特异性PCR扩增技术，建立基于实时荧光PCR的试剂盒，可准确检测EGFR基因T790M突变。本发明方法操作简单，结果易读，灵敏度高，能检出含0.001％EGFR基因T790M突变的样本，实现对EGFR基因T790M突变的超灵敏检测。