本发明提供一种从毛冬青中制备四种三萜类化合物对照品的方法，包括如下步骤：醇提、萃取、柱层析分离、纯化。本发明通过对毛冬青依次进行醇提、乙酸乙酯萃取、柱层析分离、纯化，特别是配合合适的柱层析分离工艺及纯化工艺，形成特定的三萜类化合物制备工艺。采用该工艺，不仅能够同时获得到四种三萜皂苷Ilexgenin A、lexsaponin A1、Ilexsaponin B1、Ilexsaponin B2，而且纯度很高，很适合作为化学对照品，为药物分析、中药材质量评价、生物活性研究及化学结构改造、合成提供了可靠的高纯度三萜皂苷类化合物样品来源。