本发明公开了一种液相色谱法分离测定西洛多辛及其光学异构体的方法：配制系统适用性试验溶液；配制对照品溶液；配制供试品溶液；色谱测定：取系统适用性溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图Ⅰ；取对照品溶液，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度；取供试品溶液和对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图Ⅱ和Ⅲ，根据色谱图Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分析计算。本发明能够简单、快速、准确地分离、检测出西洛多辛及其光学异构体。