本发明公开了一种液相色谱法分离测定瑞舒伐他汀叔丁酯及其光学异构体的方法：配制消旋体混合物储备液；配制系统适用性试验溶液；配制供试品溶液；色谱测定：取空白溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图Ⅰ；取系统适用性试验溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图Ⅱ；取供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图Ⅲ，根据色谱图Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分析计算。本发明分析时间较短，专属性好，灵敏度高，能够快速、有效、准确地分离、检测出瑞舒伐他汀叔丁酯及其光学异构体，从而更好地控制终产品瑞舒伐他汀叔丁钙的质量。