本发明涉及耐热甜味蛋白hairpin‑monellin及其制备方法。该蛋白的序列为：第一氨基酸序列‑发卡结构蛋白结构域氨基酸序列‑第二氨基酸序列；所述第一氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述第二氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。该制备方法包括：将核酸与表达载体相连接，得重组表达载体；将重组表达载体转化宿主细胞，得重组宿主细胞；将重组宿主细胞进行培养，并诱导表达蛋白，收集并纯化所得蛋白，即得耐热甜味蛋白hairpin‑monellin。本发明的耐热甜味蛋白hairpin‑monellin不仅保持原先的甜味水平，还显著提升了耐热温度。