本实用新型提供了一种大肠杆菌表达蛋白纯化装置，属于生物制药领域，包括保温箱体、蛋白原液箱、废蛋白清洗液箱、蛋白清洗液箱、进液开关阀、泵、镍柱床、废液开关阀、纯化液开关阀、废液收集箱、纯化液收集箱、智能测量计和箱门，箱体内部上端由左向右依次设置蛋白原液箱、废蛋白清洗液箱和蛋白清洗液箱，蛋白原液箱下端由上到下依次设置进液开关阀、泵、镍柱床和废液开关阀，废液开关阀左端设置纯化液开关阀，废液开关阀下端设置废液收集箱，纯化液开关阀下端设置纯化液收集箱，智能测量计设置在废液收集箱和纯化液收集箱内部，保温箱体前端设置箱门；本实用新型结构简单，成本低廉，纯化效果好，操作简便，有温度保护，保证蛋白活性。