本发明公开了一种光交联丝素蛋白的改性及其原位药物负载水凝胶的制备方法，该方法用硅烷偶联剂类改性剂或丝素蛋白改性剂，对丝素蛋白进行光交联改性。再将改性丝素蛋白与光引发剂、光固化单体、交联剂及药物等均匀混合，经特定光源辐照原位制备药物负载丝素蛋白复合水凝胶。该方法可使丝素蛋白与单体及交联剂在低温环境下发生共价交联，显著改善丝素蛋白复合水凝胶的物理机械性能；可通过对改性剂用量和种类的选用调控丝素蛋白复合水凝胶体系的交联密度和生物可降解性；可根据个体患者的病情差异，对添加药物的种类及计量进行定制。本发明制备的光交联丝素蛋白复合水凝胶在组织工程及生物医药等领域有广阔的应用前景。