本发明属于医药生物领域，具体涉及联合MSLN单链抗体和CCL19杀伤胃癌细胞的CAR载体及其构建方法和应用。该CAR载体包括MSLN单链抗体和趋化因子CCL19，CAR结构为CD8leader‑MSLN scfv‑CD8α‑CD28‑CD137‑CD3ζ‑IRES‑CCL19，以病毒感染方式获得含有该治疗载体的T细胞，即CAR‑T细胞(Chimeric Antigen Receptor T‑Cell)，通过表达CAR结构，靶向识别和杀伤MSLN阳性表达的胃癌细胞。趋化因子CCL19趋化T细胞浸润肿瘤组织，使CAR‑T细胞表现出更强的肿瘤细胞杀伤能力。