本发明公开了一种减少多糖积累强化光滑球拟酵母生产丙酮酸的方法，属于发酵工程技术领域。本发明通过在光滑球拟酵母菌株中敲除掉多糖合成相关基因CAGL0H02695g和CAGL0K10626g，获得了一株高产丙酮酸的工程菌株TGΔarg8Δura3(CAGL0H02695g : : ARG8；CAGL0K10626g : : URA3)，相对于对照菌T.glabrata，其丙酮酸的产量、丙酮酸生产强度和底物转化率分别提高了12.8％、13.6％和34.8％，而细胞干重、葡萄糖消耗速率和副产物多糖分别降低了12.5％、17.9％和16.6％。