本发明涉及药物合成及化工领域，特别涉及一种德谷胰岛素前体的纯化方法，本发明将经大肠杆菌发酵得到的包涵体通过变性复性后，经酶切及阳离子交换层析一步纯化，可以制备得到纯度98％以上的德谷胰岛素前体；本发明中变性后的样品不经过阳离子交换层析捕获胰岛素原步骤，直接进行复性；酶切后纯度约30％，经过一步离子交换层析即可直接得到98％以上纯度的德谷胰岛素前体；本发明减少了德谷胰岛素前体制备工序，减少了纯化步骤，降低多工艺步骤导致的损失，简化生产工艺，降低生产成本。