本发明属于左氧氟沙星检测技术领域，公开了一种血浆中左氧氟沙星的定量检测方法，包括：称取左氧氟沙星对照品和左氧氟沙星‑d8，用甲醇和甲醇水溶液溶解稀释成系列左氧氟沙星工作溶液内标工作溶液；利用内标工作溶液和甲醇沉淀剂预处理血浆样品，再进行LC‑MS/MS分析；再用空白血浆和系列左氧氟沙星工作溶液，配制成系列校正标样及随行质控样品，然后分别进行LC‑MS/MS测定，以左氧氟沙星和内标左氧氟沙星‑d8的色谱峰面积比为纵坐标，血浆中左氧氟沙星的浓度为横坐标制作标准曲线，计算血浆样品中的左氧氟沙星浓度。本发明的优点在于，该方法采用沉淀前处理、LC‑MS/MS质谱仪进行测定，操作快速简单、分离效果好、定性准确、检测灵敏度高。