本发明涉及测定人血浆中连翘苷及代谢物苷元葡萄糖醛酸结合物、苷元硫酸结合物的检测方法，通过LC‑MS/MS对血浆中连翘苷及代谢物苷元葡萄糖醛酸结合物、苷元硫酸结合物进行分析。本发明方法优选采用蛋白沉淀预处理方法，以替尼泊苷为内标，采用Gemini‑C18柱，梯度洗脱，电喷雾电离源(ESI)串联质谱检测。本发明专一性选择性强、灵敏度高、检测快速、样品用量小，简单、可靠、高通量、条件可控、满足临床大批量样品分析需求。