本发明公开了一种分离纯化单克隆抗体的方法，该方法包括：将包含单克隆抗体的细胞培养上清液进行Protein A亲和层析，以便获得第一洗脱组分；将该第一洗脱组分保持特定pH值状态下室温放置特定时间，以便获得经过低pH值灭活病毒处理的第一洗脱组分；将经过低pH值灭活病毒处理的第一洗脱组分中和后进行阳离子交换层析，以便获得第二洗脱组分；将该第二洗脱组分稀释后进行阴离子交换层析，以便获得流穿；利用除病毒过滤器，将该流穿进行过滤，以便获得滤液；以及将该滤液依次进行超滤浓缩和洗滤更换缓冲液，以便得到该单克隆抗体的原液。该方法简单易行，所得产品内毒素含量及其它各项质量指标均符合单克隆抗体药物的质量标准。