本发明公开了一种苗药黑骨藤HPLC指纹图谱研究及多成分含量测定方法。采用HPLC法建立不同产地黑骨藤指纹图谱，并测定其中4种咖啡酰基奎宁酸类化学成分含量，为黑骨藤药材品质评价提供依据；色谱柱为Xtimate C18(4.6mmx250mm, 5μm)；以0.1％磷酸水溶液(A)‑乙腈(B)为流动相，梯度洗脱；流速1mL/min；柱温30℃；进样量10μL，检测波长为330nm；使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对样品进行相似度分析，通过黑骨藤HPLC指纹图谱与含量测定，能同时测定4种咖啡酰基奎宁酸类化学成分含量，不同产地之间该4种成分有较大的差异，各成分含量与产地有一定的关联为后期苗药黑骨藤质量标准研究奠定基础。