本发明公开了一种抑制人EDARADD基因表达的shRNA、慢病毒载体及其构建方法和应用，首先合成针对RNA干扰靶点序列的DNA oligo的正链和反链；正链和反链退火形成带粘性末端的双链DNA；通过酶切使慢病毒载体线性化，将线性化载体与双链DNA连接；将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，对得到的阳性克隆进行PCR鉴定；质粒抽提，用于下一步病毒包装。本发明以EDARADD基因为模板设计了RNA干扰靶点序列，根据选取的靶点序列设计shRNA干扰序列，包装构建RNA干扰慢病毒载体，对EDARADD基因进行敲减后，会显著影响舌鳞癌细胞CAL‑27细胞的增殖，影响细胞克隆形成能力，并促进细胞的凋亡。