本发明公开了一种MBA桥联环糊精功能化手性整体柱及其制备与应用，属于分析化学领域。所述的整体柱是先将环糊精SH‑β‑CD与配体衍生剂MBA溶于去离子水中，在AIBA为引发剂的条件下反应生成桥联环糊精，然后加入亲核试剂尿素和可质子化试剂甲醛溶液，在催化剂尿素的作用下一步聚合制得。本发明制备MBA桥联环糊精功能化手性整体柱的方法简单，反应快速，通过功能桥构建的环糊精双分子桥联结构，可以充分发挥双分子间以及与桥链的协同作用，显著增强固定相的手性识别能力，使其在电色谱中展现出对氨基酸、酒石酸美托洛尔等不同类别手性药物的优异拆分能力，从而可应用于药物手性拆分领域。