本发明提供一种人血浆RASSF1A基因甲基化检测试剂盒及检测方法，所述试剂盒包括：针对人RASSFIA基因启动子区中CpG富集位点设计的序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的甲基化特异性引物对。本发明的检测方法解决了手术标本的获取创伤性大，甲基化的检出率也相对较低等缺陷。检测针对RASSFlA基因启动子区中CpG位点，特异性强、获取容易、创伤性小。