本发明属于医药化工领域，公开了一种N‑乙酰‑D‑氨基葡萄糖的提纯分离方法。本发明N‑乙酰‑D‑氨基葡萄糖的提纯分离方法包括以下步骤：往甲壳素粉末中加入乳酸甘氨酸盐酸盐和盐酸，混合，过滤得滤液；升温并滴加盐酸，搅拌，冷却脱色得D‑氨基葡萄糖盐酸盐；加入乙醇钠的乙醇溶液，过滤得游离D‑氨基葡萄糖溶液；加入乙酸酐得到含N‑乙酰‑D‑氨基葡萄糖的溶液；浓缩，降温，结晶过滤得N‑乙酰‑D‑氨基葡萄糖粗品，用无水乙醇浸泡后搅拌过滤，干燥即得高纯度N‑乙酰‑D‑氨基葡萄糖。本发明的方法可得到纯度高达99.95％以上的N‑乙酰‑D‑氨基葡萄糖，工艺过程简洁，易进行后处理，成本低，使用的醇类溶剂可回收利用，环保经济，适合大规模的推广和应用。