本发明属于病毒核酸检测领域，具体涉及一种用于定量检测人巨细胞病毒的微滴数字PCR试剂盒及检测方法。微滴数字PCR试剂盒包括微滴数字PCR检测试剂，微滴数字PCR检测试剂中含有用于检测人巨细胞病毒核酸的引物和探针；用于检测人巨细胞病毒核酸的引物和探针包括由SEQ ID NO : 1所示的正向引物、由SEQ ID NO : 2所示的反向引物、由SEQ ID NO : 3所示的探针；探针的两端标记有荧光基团。本发明的试剂盒具有快速精确、特异性好、灵敏度高、无需依赖标准品，可直接进行绝对定量。