本发明属于病毒核酸检测领域，具体涉及一种用于定量检测EB病毒核酸的数字PCR试剂盒及检测方法。本发明试剂盒含有数字PCR反应液和质控品；数字PCR反应液中含有用于检测EB病毒核酸的引物和探针，包括由SEQ ID NO : 1所示的正向引物、由SEQ ID NO : 2所示的反向引物、由SEQ ID NO : 3所示的探针；探针的两端标记有荧光基团。本发明的试剂盒及检测方法可实现对核酸分子的绝对定量，从而避免了由PCR扩增效率差异所导致的偏差，具有更高的精确度、灵敏性和重复性，易于标准化。