本申请涉及基因多态性检测领域，具体讲，涉及一种叶酸相关基因多态性检测的试剂盒及其使用方法。本申请的试剂盒包括核酸扩增试剂，核酸扩增试剂包括叶酸野生型反应液、叶酸突变型反应液和混合酶液；叶酸野生型反应液中含有用于检测野生型基因的引物和探针，叶酸突变型反应液中含有用于检测突变型基因的引物和探针。本申请的试剂盒具有灵敏度高、特异性强、稳定性好的技术优势。