本发明提供一种CD8 T细胞的扩增培养方法，即在下列物质的存在下，诱导扩增培养CD8 T细胞：K3EC细胞；所述K3EC细胞为表达CD2配体CD58、NKG2D配体MICA/B和CD137配体CD137L的K562工程细胞，用于提供激活CD8 T细胞的共刺激受体第2信号；靶标抗原的肽段重叠文库，用于提供激活CD8 T细胞的TCR第1信号。本方法实现抗原(CMV‑pp65)特异性CD8 T细胞的快速高效扩增；通过扩增获得的CD8 T细胞在预防和治疗CMV感染及CMV相关癌症的治疗中具有较高的临床应用价值。